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液氮超低溫保藏菌種程序

點擊次數:257 更新時間:2023-07-20

  1、容器的選擇:使用帶螺旋蓋的2ml塑料安培瓶。液氦杜瓦

  2、檢查安培瓶是否滲漏:用0.05%的亞甲基藍水溶液在4℃浸泡30-45分鐘,沖洗干凈,棄去含有藍色染料的安培瓶,其余的安培瓶備用。

  3、打印標簽(激光打印)。

  4、容器的滅菌:先用蒸餾水漂洗干凈安培瓶,再用蒸餾水在滅菌鍋中121℃浸泡滅菌15分鐘,干燥并將打印好的標簽放入安培瓶中,略擰緊螺旋蓋,再行121℃滅菌30分鐘。液氦杜瓦

  5、保藏菌菌齡:處于**生長量階段或對數生長期后期。

  6、保護劑:選用5-10%的甘油或二甲基亞砜作保護劑。

  1)甘油的準備:在121℃滅菌15分鐘,2-8℃貯存。甘油一般以兩倍*終所需濃度的水溶液保存,然后與同等量的細胞懸液混合。若不用細胞懸液,則以*終所需濃度的水溶液保存。

  2)二甲基亞砜:用0.22um的聚四氟乙烯過濾膜過濾除菌。過濾膜預先用甲醇和二甲基亞砜漂洗。無菌的二甲基亞砜以10-15ml裝量2-8℃避光保存。

  7、分裝:在無菌條件下,將細胞懸液(從平板上打下直徑為5cm的菌塊)分裝于安培瓶中,并注入保護劑,擰緊螺旋蓋。

  8、將安培瓶固定在鋁夾上,貼好標簽。為了便于取用,一般一個鋁夾上僅放一個菌株。

  9、將控溫系統先預冷到4℃,再將鋁夾放入其中。以每分鐘1℃降溫至-40℃,然后以每分鐘10℃降溫至-90℃。降溫以后,將鋁夾轉移至處于液氮中的儲存器中保存。

  10、菌種的復活:將液氮保藏的菌種取出,迅速放入37℃水浴中解凍。一般需2至2.5分鐘,等解凍后,再及時轉接到合適的培養基中培養。


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